今天百萤为大家介绍一个非常实用的小技巧,用于确定荧光分子的亮度。如果你想选购一种荧光探针,而你已经确切的了解到了几种探针均可以满足你的实验要求,但是,哪一个才是荧光强度好的呢?求人不如求己,实验还得靠自己!今天小萤告诉你之后,请收藏好它!
荧光分子的亮度取决于两个因素:
消光系数(ε):荧光分子吸收特定波长的光的强度。
荧光量子产率(Φ):吸收光转换为发射光的效率。
有小伙伴要问了,知道了消光系数和荧光量子产率又该怎么办呢?请记住以下公式:
亮度=消光系数(ε) x 荧光量子产率(Φ)
实例验证:大家对于PE、APC、Cy5应该都是比较熟悉的。
PE = 1,960,000 cm-1M-1 (ε)x 0.84(Φ) = 1646400
APC = 700,000 cm-1M-1 (ε)x 0.68 (Φ)= 476000
Cy5 = 250,000 cm-1M-1 (ε)x 0.20 (Φ)= 50000
现在相信大家不用我说,也能看出哪个更亮了吧!那有小伙伴又要问了,可是荧光探针那么多,我找不到确切的消光系数和荧光量子产量啊!别着急,下面是百萤总结好的常用的产品消光系数和荧光量子产率请收好!
产品名称
消光系数(ε)cm-1M-1
荧光量子产率(Φ)
备注
iFluor 350
20000
0.95
在水性缓冲液中(pH=7.2)
iFluor 405
37000
0.91
iFluor 430
40000
0.78
iFluor 450
40000
0.82
iFluor 488
75000
0.9
iFluor 514
80000
0.83
iFluor 532
90000
0.68
iFluor 546
100000
0.67
iFluor 555
100000
0.64
iFluor 560
120000
0.57
iFluor 568
100000
0.57
iFluor 594
180000
0.53
iFluor 610
110000
0.85
iFluor 633
250000
0.29
iFluor 647
250000
0.25
iFluor 660
250000
0.26
iFluor 670
250000
0.63
iFluor 680
220000
0.23
iFluor 700
220000
0.23
iFluor 750
275000
0.12
iFluor 790
250000
0.13
iFluor 800
250000
0.11
iFluor 810
250000
0.05
iFluor 820
250000
N/D
iFluor 840
200000
0.02
在PBS中
产品名称
消光系数(ε)cm-1M-1
荧光量子产率(Φ)
备注
Alexa Fluor 488
73000
0.92
缓冲液(pH=7.2)
Alexa Fluor 532
81000
0.61
Alexa Fluor 546
112000
0.1
Alexa Fluor 568
88000
0.69
Alexa Fluor 594
92000
0.66
Alexa Fluor 647
270000
0.33
Alexa Fluor 660
132000
0.37
Alexa Fluor 680
183000
0.36
Alexa Fluor 700
205000
0.25
Alexa Fluor 750
290000
0.12
产品名称
消光系数(ε)cm-1M-1
荧光量子产率(Φ)
备注
Cy3
150000
0.04
Cy3B
120000
0.58
Cy3B酸
120000
0.58
Cy5
250000
0.27(PBS)/0.4(乙醇)
Fluo-4
82000
0.16
Fluo-8
23430
0.16
Cal-590
78000
0.62
7-AAD
27500
0.02
在双链DNA结合的情况下
AFC
17000
0.53
在乙醇中
Hoechst 33258
46000
0.034
SYTO 17
88000
0.964
SYTOX绿色
67000
0.53
在DNA中
JOJO-1
171000
0.44
在DNA中
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